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1、產品簡介CyTOF2質譜流式細胞儀是新一代的多參數流式細胞儀
1、產品簡介
CyTOF2質譜流式細胞儀是新一代的多參數流式細胞儀。它使用金屬元素做為流式抗體、染料的標志物,利用質譜對標記細胞進行定量檢測。
這一技術的應用,一方面使流式檢測通道數量大幅提高到了上百個,提升了從單個樣品獲得的信息量;另一方面避免了通道間信號的干擾,大大簡化了實驗設計,提升了數據的可靠性。
信號分子檢測數量的增加意味著對細胞群內的表型進行更精準的觀察和分類,意味著對細胞株的均一性有更準確的認識,也意味著對細胞內信號轉導網絡有更清晰的了解;同時它也為單細胞蛋白質組的發(fā)展提供了新的研究手段。
2、儀器原理
CyTOF質譜流式細胞儀的原理如下圖所示,它采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體或者染料)標記或識別細胞表面和內部的信號分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用感應耦合等離子質譜(ICP-MS)觀察單個細胞的原子質量譜,將原子質量譜的數據轉換為細胞表面和內部的信號分子數據,并通過專業(yè)分析軟件對獲得的數據進行分析,從而實現對細胞表型和信號網絡的精細觀察[4] 。
3、應用實例
(1)實現了骨髓等復雜細胞群體的精細免疫分群
質譜流式細胞術實現了單個細胞上42個參數的同時測定;通過對13個表面抗原表達情況分析,對人骨髓細胞群進行高精度的分型,全景展示了骨髓中造血系統(tǒng)不同分化階段細胞的具體組成 [3]。
上圖顯示的是CyTOF對人骨髓細胞的分型,圓圈的大小表示各群細胞所占的比例,顏色反映CD45RA在相應群體中的表達水平。
(2)系統(tǒng)分析骨髓細胞群體信號通路
在精細分群的基礎上,CyTOF還可以檢測細胞內各個信號分子的水平,從而實現對細胞內信號通路的系統(tǒng)性分析:
如圖中所示,在IL-7處理的條件下,骨髓細胞中T細胞內pSTAT5的水平明顯升高[3]。
(3)研究基因在分化、發(fā)育過程中的表達變化
下圖顯示Pre-B細胞向成熟B細胞分化過程中,多個蛋白的表達變化情況 [3]:
(4)研究細胞亞群之間的功能聯系
CD8+T細胞25個Marker的表達數據經PCA處理后,自動聚集成四個相連的細胞群。形象的說明了T細胞成熟的四個階段是一個連續(xù)的過程[1]:
(5)高通量藥物篩選
結合Barcorde細胞標記技術,CyTOF可以一次檢測96個不同的樣品,通過對其20多個表面標志和信號分子的檢測,細致分析各亞群細胞對每個藥物的不同反應,實現高通量的藥物篩選[2]。
4、相關文獻(附全文)
1. Newell, E.W., et al., Cytometry by time-of-flight shows combinatorial cytokine expression and virus-specific cell niches within a continuum of CD8+ T cell phenotypes. Immunity. 36(1): p. 142-52. 下載
2. Bodenmiller, B., et al., Multiplexed mass cytometry profiling of cellular states perturbed by small-molecule regulators. Nat Biotechnol. 30(9): p. 858-67.下載
3. Bendall, S.C., et al., Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum.
Science. 332(6030): p. 687-96. 下載
4. Bendall, S.C. and G.P. Nolan, From single cells to deep phenotypes in cancer. Nat Biotechnol. 30(7): p. 639-47.下載
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